文献类型：期刊文章

作　　者：王彦彬[1] 崔保安[1] 陈红英[1] 王亚宾[1] 张红英[1] 魏战勇[1]

机构地区：[1]河南农业大学牧医工程学院/河南省动物性食品安全重点实验室,郑州450002

出　　处：《中国农业科学》

基　　金：国家"十一五"科技支撑计划专项(2006BAD06A08)

年　　份：2009

卷　　号：42

期　　号：4

起止页码：1435-1441

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2008、CAB、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、FSTA、GEOBASE、IC、JST、RCCSE、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、ZR、核心刊

摘　　要：【目的】为获得重组猪干扰素α。【方法】本研究应用Bac-to-Bac杆状病毒/昆虫细胞表达系统,将编码成熟猪干扰素α基因插入供体质粒pFastBacⅠ多克隆位点,置于pH启动子控制下,昆虫可识别的蜂素信号肽(honeybeemelittinsignalpeptide,HBM)取代猪干扰素α原有信号肽以实现分泌型表达,并在C端融合6个组氨酸标签以利于纯化。将构建质粒转化DH10感受态细胞进行同源重组,经抗性和蓝白斑筛选,获得重组穿梭质粒Bacmid,转染对数生长期的Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒。【结果】重组蛋白通过间接免疫荧光、Western-blot证明重组蛋白在重组杆状病毒感染的昆虫细胞中获得分泌表达。通过在猪肾细胞(PK-15)上抑制水泡性口炎病毒(VSV)致病变作用检测重组蛋白的抗病毒活性,结果表明:昆虫细胞上清的抗病毒效价达到1.07×105U·ml-1,昆虫细胞裂解液的抗病毒效价为3.15×104U·ml-1。【结论】应用蜂素信号肽实现猪干扰素α在昆虫细胞上分泌表达,为临床上防治猪病毒性疫病奠定了基础。

关 键 词：猪  干扰素 杆状病毒 昆虫细胞 表达  抗病毒活性

分 类 号：S852.4]