文献类型：期刊文章

作　　者：黄新[1] 王新华[1] 钟发刚[1]

机构地区：[1]新疆生产建设兵团绵羊繁育生物技术重点实验室,新疆石河子832000

出　　处：《中国兽医科学》

基　　金：国家重点基础研究发展计划(973)项目前期研究专项(2008CB117017)

年　　份：2009

卷　　号：39

期　　号：4

起止页码：321-326

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2008、CAB、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2011_2012、IC、JST、RCCSE、WOS、ZGKJHX、ZR、核心刊

摘　　要：应用RT-PCR方法扩增了牛病毒性腹泻病毒(BVDV)新疆玛纳斯分离株的E2基因,应用软件对序列进行分析,预测了可能存在的抗原表位;分别扩增了包含预测抗原位点的片段(1～118)-(144～340)-(100～300)-(1～345),并将其克隆到pMD18-T Si mple载体中;将重组质粒pMD-(1～118)、pMD-(144～340)、pMD-(100～300)、pMD-(1～345)的HindⅢ+BamHI双酶切产物分别插入pET28a(+),构建了原核表达载体pET-(1～118)、pET-(144～340)、pET-(100～300)、pET-(1～345)。将这些原核表达载体分别导入BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达,收集菌液进行SDS-PAGE分析,结果显示,4个重组质粒在BL21(DE3)中均成功表达,表达融合蛋白的分子质量分别为18.6、28.2、29.2和43.9 ku,与预测蛋白质分子质量一致,Western-blot分析结果表明,28.2、29.2和43.9 ku的融合蛋白可被牛抗BVDV阳性血清识别。

关 键 词：牛病毒性腹泻病毒 E2基因 克隆 抗原表位 表达  

分 类 号：S852.659.6] Q786[动物医学类]