文献类型：期刊文章

作　　者：姜娜[1] 王芃[1] 王艳春[1] 袁盛凌[1] 展德文[1] 陶好霞[1] 王令春[1] 刘纯杰[1]

机构地区：[1]军事医学科学院生物工程研究所,病原微生物与生物安全国家重点实验室,北京100071

出　　处：《生物技术通讯》

年　　份：2009

卷　　号：20

期　　号：2

起止页码：173-176

语　　种：中文

收录情况：CAS、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的:利用λRed重组系统敲除伤寒沙门氏菌的rfaH基因。方法:以伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi Ty2,S.ty2)基因组为模板扩增得到的同源臂,与两端带有FRT位点的卡那霉素抗性基因片段共同构建同源重组载体;以重组载体为模板扩增打靶片段,将其转化S.ty2;在抗生素压力和λRed重组系统帮助下,打靶片段和菌体基因组发生同源重组,通过卡那抗性筛选得到带有抗性标记的重组菌;转入重组酶表达质粒pCP20以去除抗性标记,得到保留单一FRT位点的突变菌株;通过PCR鉴定重组菌,并经透射电子显微镜分析表型。结果:在S.ty2中敲除了rfaH基因,经PCR扩增和序列测定正确;初步的表型分析表明突变体的鞭毛合成显著减少。结论:获得了S.ty2突变株,为将沙门氏菌进一步减毒成为疫苗表达载体奠定了基础。

关 键 词：伤寒沙门氏菌 λRed重组系统  rfaH基因  基因敲除

分 类 号：Q78]