文献类型：期刊文章

作　　者：张燕[1] 王如兴[2] 李肖蓉[2] 陈永井[1] 杨丽华[1] 党时鹏[1] 王明元[3] 张学光[1]

机构地区：[1]苏州大学生物技术研究所江苏省干细胞重点实验室,江苏省苏州市215007 [2]南京医科大学附属无锡市人民医院心内科,江苏省无锡市214002 [3]苏州红十字中心血站,江苏省苏州市215007

出　　处：《中国组织工程研究与临床康复》

基　　金：南京医科大学科技发展基金重点项目资助(07NMUZ037);无锡市科学技术局科技支撑资助(CSE00809)~~

年　　份：2009

卷　　号：13

期　　号：7

起止页码：1255-1258

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2008、CAS、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD_E2011_2012、EMBASE、IC、核心刊

摘　　要：背景:近年来许多研究发现血红素加氧酶1具有抗炎、抗氧化及抗凋亡等作用,并且在心肌缺血-再灌注损伤等应激反应中有重要的保护作用,从而成为研究热点。目的:克隆大鼠血红素加氧酶1全长基因,并将其于真核表达载体PIRES2-EGFP相连接,构建血红素加氧酶1的真核表达载体。设计、时间及地点:实验于2008-03/06在苏州大学生物技术研究所完成。材料:成年雄性SD大鼠,由苏州大学动物实验中心提供,用于脾脏细胞总RNA的提取;克隆载体PMD18-T购自Takara公司;表达载体PIRES2-EGFP由苏州大学生物技术研究所保存。方法:分离大鼠脾脏获取脾脏细胞,Trizol法提取脾脏细胞的总RNA,经反转录-聚合酶链反应扩增获得血红素加氧酶1基因,将扩增出来的产物与克隆载体PMD18-T连接,转化TOP10感受态细菌,挑取阳性克隆经PCR及酶切鉴定后测序确证。测序正确后抽提质粒作为模板进行PCR,Sal-Ⅰ和BamH-Ⅰ同时双酶切PCR产物和载体PIRES2-EGFP,再在T4DNA连接酶的作用下进行连接,构建其真核表达载体。主要观察指标:血红素加氧酶1基因的克隆和DNA测序结果证实序列是否正确;PIRES2-EGFP/血红素加氧酶1真核表达载体的构建以及测序证实目的基因成功插入载体。结果:①实验完成了大鼠血红素加氧酶1基因的克隆,所获得的序列与GeneBank中收录的大鼠血红素加氧酶1序列完全一致。②构建真核表达载体PIRES2-EGFP/血红素加氧酶1,测序正确说明血红素加氧酶1基因成功插入表达载体PIRES2-EGFP中。结论:实验成功克隆了大鼠血红素加氧酶1基因全长,并构建了其真核表达载体。

关 键 词：血红素加氧酶1 克隆 表达载体  构建  

分 类 号：R394.33]