文献类型：期刊文章

作　　者：郭东升[1] 王新兴[2] 刘晓华[2] 战锐[2] 袁聚祥[1] 钱令嘉[2]

机构地区：[1]华北煤炭医学院预防医学系,河北唐山063000 [2]军事医学科学院卫生学环境医学研究所应激医学实验室,天津300050

出　　处：《中国应用生理学杂志》

基　　金：国家自然科学基金项目(30570753)

年　　份：2009

卷　　号：25

期　　号：1

起止页码：139-144

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2008、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、JST、PUBMED、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的:构建携带prohibitin(PHB-1)基因的MiR RNAi真核表达载体pcDNA^(TM)6.2-GW/EmGFP-MiR,并观察其转染HEK293细胞株前后PHB-1的表达变化。方法:根据GenBank中prohibitin的序列,设计特异的两条互补的单链寡核苷酸退火后形成双链,克隆至pcDNA^(TM)6.2-GW/EmGFP-MiR质粒缺口末端,连接在质粒上生成含MiR RNAi pcDNA^(TM) 6.2-GW/EmGFP-MiR-PHB载体,测序鉴定后,用脂质体将重组子转染至HEK293细胞中,用Western blotting检测干扰后HEK293细胞内PHB-1表达的变化。结果:将目的序列成功连接到载体上,并经测序分析证实载体构建成功。Western blotting检测结果证实构建的PHB-1 MiR RNA表达重组体可显著抑制HEK293细胞内PHB-1的表达。结论:成功构建了携带PHB-1基因的MiR RNAi真核表达载体。

关 键 词：PROHIBITIN HEK293细胞 RNA干扰

分 类 号：Q786]