文献类型：期刊文章

作　　者：孙爱华[1] 樊欢[2] 夏肖萍[3] 李向阳[4] 严杰[2]

机构地区：[1]浙江医学高等专科学校,浙江杭州310053 [2]浙江大学医学院病原生物学系,浙江杭州310058 [3]浙江大学医学院附属邵逸夫医院检验科,浙江杭州310016 [4]温州医学院附属第二医院检验科,浙江温州325000

出　　处：《浙江大学学报（医学版）》

基　　金：浙江省自然科学基金资助项目(X206956);卫生部科研基金资助项目(WKJ2007-2-005)

年　　份：2008

卷　　号：37

期　　号：6

起止页码：605-611

语　　种：中文

收录情况：CAS、CSCD、CSCD_E2011_2012、EMBASE、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的:构建肺炎链球菌ciaH和ciaR基因的原核表达系统,探讨CiaH和CiaR封闭后细菌耐药性变化。方法:采用PCR扩增全长ciaH和ciaR基因,以常规基因工程技术建立其原核表达系统。采用SDS-PAGE及Bio-Rad凝胶图象分析系统检测目的重组蛋白rCiaH和rCiaR表达量。制备rCiaH和rCiaR兔抗血清及其IgG。检测IgG胞外或胞内封闭肺炎链球菌菌株CiaH和CiaR后,细菌对青霉素和头孢噻肟耐药性的变化。结果:与报道序列比较,所克隆的ciaH和ciaR基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为99.9%～100%和100%。所构建的工程菌E.coli BL21DE3pET42a-ciaH和E.coli BL21DE3pET42a-ciaR能高效表达目的重组蛋白rCiaH和rCiaR,其产量分别高达细菌总蛋白的33%和45%。rCiaH、rCiaR抗血清及其IgG免疫双扩散效价分别为1∶4、1∶4和1∶1、1∶1。CiaH-IgG胞外或胞内封闭CiaH、CiaR-IgG胞内封闭CiaR后,青霉素及头孢噻肟敏感菌株可出现对两种抗生素的耐药性,但对耐药菌株耐药性无明显影响。结论:成功地构建了肺炎链球菌ciaH/ciaR基因原核表达系统,为深入研究该TCS与耐药性关系奠定了基础。CiaH和CiaR均与肺炎链球菌对青霉素及头孢噻肟耐药性有关。

关 键 词：链球菌,肺炎/药物作用  基因,细菌  β内酰胺抗药性  二元信号传导系统  ciaH/ciaR基因  Β-内酰胺类抗生素 耐药性

分 类 号：R378]