文献类型：期刊文章

作　　者：陈晶[1] 曲章义[1] 魏凤香[1] 张鸿彦[1] 王鹏[1] 王迎晨[1] 姜海英[1]

机构地区：[1]哈尔滨医科大学公共卫生学院卫生微生物学教研室,150081

出　　处：《中国地方病学杂志》

基　　金：国家自然科学基金（30771909）;黑龙江省自然科学基金重点项目（ZJY0701）;教育部博士点基金（20070226007）

年　　份：2008

卷　　号：27

期　　号：6

起止页码：686-690

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2004、CAS、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2011_2012、EMBASE、IC、JST、核心刊

摘　　要：目的建立一种特异性强、灵敏度高、操作简便的呼吸道腺病毒检测方法，为临床呼吸道腺病毒通用特异诊断试剂的研发奠定实验基础。方法用生物信息学软件DNAMAN5．2．2、GeneRunner3．05、BLAST对GenBank中已收录的10个型别人呼吸道腺病毒核酸全序列进行比对分析，找m高度保守序列，设计5对腺病毒通用特异引物，同时确保PCR产物具有型别特异性。用NP-40裂解法制备模板，对引物的有效性、特异性及灵敏忡进行验证．并应用于64例急性呼吸道感染患儿咽拭子标本的检测，阳性标本的PCR产物直接测序鉴定血清型．将阳性标本接种HeLa细胞，光镜下观察细胞病变，电镜下观察病毒形态。结果BLAST结果表明，5对引物与其他病毒、细菌及人类基因组等无高度同源性，是腺病毒特异性引物。用5对引物扩增人3型腺病毒DNA，均出现阳性目的条带，但不能检测呼吸道合胞病毒和柯萨奇病毒，验证了引物的有效性和腺病毒特异性。模板稀释、病毒稀释均可检测到10。梯度，说明引物具有较高的灵敏性，同时验证了NP-40裂解法的稳定性。64例临床咽拭子标本巾检测出2例阳性标本，阳性率为3．13％（2／64）。阳性标本接种HeLa细胞，光镜下可见细胞变圆、聚集成葡萄串状、脱落等腺病毒所致细胞病变，电镜下可见细胞核内有典型的品格状排列的腺病毒颗粒。PCR产物测序结果表明，2株病毒均为B组腺病毒。结论成功设计了腺病毒通用的、特异的，同时扩增产物又具有腺病毒型别特异性的引物。用该引物建立的PCR方法检测呼吸道标本中的腺病毒DNA具有灵敏和特异的特点，适用于临床常规诊断腺病毒感染。

关 键 词：腺病毒,人  呼吸系统  诊断试验,常规  聚合酶链反应

分 类 号：R686]