文献类型：期刊文章

作　　者：郭丽琼[1,2] 刘二鲜[1] 王杰[1] 林俊芳[1,2]

机构地区：[1]华南农业大学食品学院,广州510640 [2]华南农业大学生物质能研究所,广州510640

出　　处：《中国农业科学》

基　　金：国家"863"计划项目(2006AA10Z301);国家自然科学基金(30371000;30671457);广东省自然科学基金(5006680;032239)

年　　份：2008

卷　　号：41

期　　号：11

起止页码：3728-3734

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2004、CAB、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、FSTA、GEOBASE、IC、JST、RCCSE、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、ZR、核心刊

摘　　要：【目的】建立PEG介导的高效银耳(Tremella fuciformis)芽孢遗传转化体系。【方法】采用PEG介导的原生质体法把表达质粒pAN7-1(含有构巢曲霉gpd-An启动子和潮霉素抗性基因hph)和pLg-hph(含香菇gpd-Le启动子和hph基因)转化进银耳芽孢的细胞中;采用夹层法在含50μg·ml-1潮霉素的筛选培养基中初筛银耳芽孢假定转化子,之后转接于潮霉素含量为100μg·ml-1的PDA平板上进行第2次筛选。【结果】PEG4000浓度为25%时介导的银耳芽孢原生质体初转化率最高;pLg-hph假定转化子经过PCR鉴定及Southern杂交验证,结果表明hph基因能有效整合进银耳芽孢的基因组中,其转化率为110个/μgDNA。而pAN7-1转化子经过PCR鉴定及Southern杂交验证,结果表明只有部分转化子基因组中整合了hph基因,其转化率只有9个/μgDNA。银耳芽孢转化子在PDSA培养基中继代5次后仍检测到hph基因的存在,表明外源基因hph能在银耳芽孢继代中稳定遗传。【结论】25%的PEG4000能高效介导银耳原生质体的转化;香菇gpd-Le启动子是银耳芽孢表达外源hph基因的强启动子;外源hph基因能够在银耳芽孢继代培养中稳定遗传。

关 键 词：银耳 PEG介导转化  银耳芽孢  hph基因  

分 类 号：S567.34]