文献类型：期刊文章

作　　者：刘长青[1] 刘帅[1] 包阿东[1] 陆涛峰[1] 吴宏梅[1] 张洪海[2] 唐学玺[3] 关伟军[1] 马月辉[1]

机构地区：[1]中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京100094 [2]曲阜师范大学研究生处,曲阜273165 [3]中国海洋大学海洋生命学院,青岛266003

出　　处：《Zoological Research》

基　　金：国家"863"计划项目资助(2006AA10Z198;2007AA10Z170)

年　　份：2008

卷　　号：29

期　　号：4

起止页码：353-362

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2004、BIOSISPREVIEWS、CAB、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2011_2012、DOAJ、JST、PUBMED、SCOPUS、ZGKJHX、ZR、核心刊

摘　　要：采用RT-PCR与RACE方法扩增出北京油鸡腺苷酸琥珀酸裂解酶(ADSL)基因全长cDNA序列,亚克隆和序列分析结果表明:该基因开放阅读框长为1455个碱基,编码485个氨基酸;5′端非转录调控区具有典型管家基因的特征,在临近起始密码子-27号碱基发生C→T突变,该突变使得本来不是核呼吸因子2(NRF-2)结合位点的CTCC突变为NRF-2结合位点CTTC。将ADSL基因完整开放阅读框重组至融合表达载体pGEX-4T-1中,构建成北京油鸡ADSL基因融合表达载体pGEX-ADSL,转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选阳性克隆,IPTG诱导表达。经SDS-PAGE电泳显示重组融合蛋白在约80.5kD处有特异蛋白条带出现,与预期分子量大小一致,等电点为6.79。该蛋白的表达量随诱导时间的延长而增加,5h达最高值,达到细胞总蛋白的26.9%,且主要以不可溶的包涵体形式存在,经优化表达条件,成功地获得了可溶性的融合蛋白,经Glutathione Sepharase4B凝胶纯化后Western blotting检测表明其为北京油鸡ADSL蛋白,为其进一步的生物学功能及其应用研究鉴定基础。

关 键 词：北京油鸡 腺苷酸琥珀酸裂解酶  结构分析  基因表达

分 类 号：S831]