文献类型：期刊文章

作　　者：郭建巍[1] 冯健男[2] 王顺涛[2] 马骢[1] 王珍光[1] 蒋学兵[1] 沈倍奋[2]

机构地区：[1]海军总医院检验科,北京100037 [2]军事医学科学院基础医学研究所分子免疫学实验室,北京100850

出　　处：《中华微生物学和免疫学杂志》

基　　金：基金项目：国家高技术研究发展计划（863）资助项目（2004AA002020）;中国博士后基金资助项目（2004035289）

年　　份：2008

卷　　号：28

期　　号：7

起止页码：650-655

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2004、BIOSISPREVIEWS、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、EMBASE、IC、JST、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的运用计算机辅助蛋白质分子设计的方法设计针对蓖麻毒素A链（RTA）的拮抗肽，实现在大肠杆菌BL21中的可溶性表达，并对其生物学活性进行评价。方法根据RTA的晶体结构、RTA-rRNA相互作用复合物模型，在CVFF（consistent-valence force field）、Amber力场下，对RTA的空间构象进行理论模拟，初步确定其生物活性功能域；然后针对该功能域设计小分子拮抗肽，并借助人抗体重链可变区骨架，在CDR3区对拈抗肽进行展示，用重叠延伸PCR全基因合成人源化的单域抗体并克隆至载体pET-32a（＋）；双酶切和DNA测序技术对构建的载体进行鉴定；IPTG诱导人源化的单域抗体表达，用镍离子亲和层析纯化，竞争ELISA和MTr法分别进行结合和中和活性检测。结果从头搭建并设计合成了人源化的单域抗体，实现了其原核表达，并进行了生物活性检测；建立了基于人源化的单域抗体的RTA和蓖麻毒素检测方法。结论研究结果为新型蓖麻毒素小分子拈抗剂的研制奠定了理论和实验基础。

关 键 词：蓖麻毒素 单链可变区片段  人源化的单域抗体  

分 类 号：R392]