文献类型：期刊文章

作　　者：张勇[1,2] 付绍红[1,2] 张汝全[2] 牛应泽[1]

机构地区：[1]四川农业大学油菜研究中心 [2]成都市农林科学院作物所,国家油菜改良中心四川成都分中心,温江611130

出　　处：《分子植物育种》

基　　金：成都市科技局攻关项目(06GGYB446NC-030)

年　　份：2008

卷　　号：6

期　　号：4

起止页码：775-780

语　　种：中文

收录情况：CAB、CAS、CSCD、CSCD_E2011_2012、JST、RCCSE、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：为了通过转基因途径获得油菜种子中PEPC基因发生转录后基因沉默,通过PCR扩增分别分离得到了甘蓝型油菜种子特异性表达的Napin启动子序列(1138bp)和磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)基因保守序列(181bp),将它们分别克隆到pMD18-T载体中,利用中间载体pBS-NEI构建了PEPC基因的反向重复框。再将PEPC基因片段以正向的方式连接到一个可剪切的内含子5'末端,以反向的方式连接到该内含子的3'末端;然后将Napin启动子序列克隆到植物表达载体pCAMBIA1391的pUC18多克隆位点上,获得了种子特异表达的载体pCAMNapin;再将PEPase基因的反向重复序列克隆到pCAMNapin载体Napin启动子的3'末端,构建了具有种子特异性表达的PEPC基因的ihpRNA表达载体pCAMNapin-B2-NEI-B1。通过限制性内切酶酶切对载体作了鉴定分析。

关 键 词：甘蓝型油菜 PEPC基因 ihpRNA载体  Napin启动子  

分 类 号：S565.4]