文献类型：期刊文章

作　　者：刘琦[1,2] 郭艳茹[1] 刘莹[1] 柳晓兰[1] 刘静[1] 仲飞[2] 高建恩[1] 孙启鸿[1]

机构地区：[1]蛋白质组学国家重点实验室,北京蛋白质组研究中心,军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京102206 [2]燕山大学研究生院,河北秦皇岛066004

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》

基　　金：国家高技术研究发展计划(863)资助项目(20060102A3006);国家重点基础研究发展计划(973)资助项目(2006CB91083)

年　　份：2008

卷　　号：24

期　　号：8

起止页码：795-797

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2004、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、EMBASE、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的:构建降钙素原(PCT)原核表达载体,制备其多克隆抗体(pAb)和单克隆抗体(mAb),并进行特性鉴定。方法:以甲状腺癌细胞cDNA文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-PCT和PET-32a-PCT,在大肠杆菌中分别表达GST-PCT和His-PCT融合蛋白,用His-PCT免疫家兔和BALB/c小鼠制备兔pAb和鼠mAb。通过ELISA法测定抗人PCT抗血清效价;用Western blot、间接免疫荧光鉴定pAb的特异性。使用间接ELISA法筛选分泌特异性抗PCT的杂交瘤细胞株,采用Western blot和间接免疫荧光鉴定mAb的特异性。结果:构建了重组表达质粒pGEX-4T-1-PCT和PET-32a-PCT,并在大肠杆菌中表达、纯化。经ELISA法测得抗人PCT抗血清效价是1∶256 000。制备的抗PCT兔多克隆抗体可特异地识别重组和天然的PCT蛋白。获得8株可稳定分泌抗PCT的杂交瘤细胞株,可识别重组人PCT蛋白,其中有4株可特异性结合TT细胞质中的天然蛋白。结论:成功地制备出兔抗人PCT抗血清和8株抗PCT的mAb,为进一步研究PCT在严重的细菌感染和脓毒症中的病理及生理作用奠定了基础。

关 键 词：降钙素原 原核表达 抗体制备 鉴定  

分 类 号：R392.11]