文献类型：期刊文章

作　　者：万远芳[1] 刁庆春[1] 马丽娟[2] 柴友荣[2]

机构地区：[1]重庆市第一人民医院皮肤科,泸州医学院2005级研究生400011 [2]西南大学农学与生物科技学院重庆市作物品质改良重点实验室,400716

出　　处：《重庆医学》

基　　金：重庆市卫生局课题(04-2-188)

年　　份：2008

卷　　号：37

期　　号：12

起止页码：1277-1279

语　　种：中文

收录情况：CAB、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD_E2011_2012、IC、JST、PUBMED、RCCSE、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的克隆编码法国梧桐花粉主要变应原(Platanus acerifolia pollen allergen 1)的Pla a1基因,并构建原核表达载体进行表达。方法采用RT-PCR法从法国梧桐花粉总RNA中扩增Pla a1基因全长cDNA以及不含信号肽的编码区,克隆至pMD18-T载体中进行测序。采用SalⅠ+SphⅠ双酶切,将不含信号肽的编码区定向亚克隆到pQE-30载体,形成原核表达载体pQE-30-Pla a1E,转化大肠杆菌M15菌株,PCR和酶切图谱鉴定为阳性的克隆子采用IPTG诱导表达,采用SDS-PAGE电泳检测蛋白表达结果。结果通过RT-PCR从法国梧桐花序总cDNA中扩增出了Pla a1基因的全长cDNA,与已报道序列基本一致,但发现该基因在非编码区存在SNP位点,尤其是在起始密码子ATG之前的Oligo A序列存在长度多态性。本研究还克隆了一条与Pla a1高度同源的新基因Pla a1′的大部分编码区序列。以基因组DNA为模板的对比克隆表明,该基因没有内含子。克隆子菌液PCR和质粒酶切图谱鉴定均表明,pQE-30-Pla a1E构建成功。IPTG诱导的含有pQE-30-Pla a1E的大肠杆菌M15菌液表达的具有6×His标签的PLA A1E蛋白,经SDS-PAGE电泳,显示了一条约16kd的条带。结论发现了法国梧桐花粉主要变应原Pla a1基因的多态性位点,克隆了与其高度同源的另一条新基因Pla a1′的大部分编码区,成功构建了原核表达载体pQE-30-Plaa1E,并在大肠杆菌中获得高效表达,为获得重组纯化Pla a1变应原并用于花粉变应性疾病的诊治奠定了基础。

关 键 词：法国梧桐花粉  变应原 原核表达

分 类 号：R593.1]