文献类型：期刊文章

作　　者：徐忠烨[1] 程远[1] 朱晓峰[2] 唐文渊[3]

机构地区：[1]重庆医科大学附属第二医院神经外科,400010 [2]佳木斯大学神经科学研究所,154003 [3]重庆医科大学附属第一医院神经外科,400016

出　　处：《重庆医学》

基　　金：国家自然科学基金资助项目(No.30170963及No.30540062)

年　　份：2008

卷　　号：37

期　　号：10

起止页码：1057-1059

语　　种：中文

收录情况：CAB、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD_E2011_2012、IC、JST、PUBMED、RCCSE、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的构建表达人脑源性神经生长因子(hBDNF)基因的真核细胞表达载体,并且观察重组质粒在真核细胞中的表达情况。方法采用PCR方法从健康人基因组中扩增出该基因,将hBDNF的PCR产物用XhoⅠ和SalⅠ双酶切后克隆到用XhoⅠ和SalⅠ双酶切的带有EGFP和内部核糖体转入位点(IRES)的真核细胞表达载体pIRES2-EGFP中。对重组质粒进行双酶切和质粒测序鉴定后,采用阳离子脂质体Lipofectamine 2000将重组的质粒转染至真核细胞中,用RT-PCR和荧光显微镜检测基因在细胞中表达的情况。结果双酶切和质粒测序结果证明hBDNF已正确地克隆到真核表达载体pIRES2-EGFP中,质粒能在细胞中正常表达。结论成功构建了EGFP/hBDNF表达载体,为应用hBDNF治疗中枢神经系统疾病奠定坚实的基础。

关 键 词：人脑源性神经生长因子  重组质粒 转染

分 类 号：Q78]