文献类型：期刊文章

作　　者：王一平[1] 谭艳[1] 王家宁[1] 张少峰[2] 郭凌郧[1] 孔霞[1] 罗超[3]

机构地区：[1]郧阳医学院附属人民医院临床医学研究所,湖北十堰442000 [2]郧阳医学院附属人民医院泌尿外科研究所,湖北十堰442000 [3]郧阳医学院基础医学研究所,湖北十堰442000

出　　处：《郧阳医学院学报》

基　　金：国家自然科学基金(No:30600614);教育部重点项目(No:207072);湖北省自然科学基金(No:2006ABA342);教育厅中青年项目(No:Q200624003);郧阳医学院博士研究生启动金(No:2006QDJ09);十堰市人民医院研究生启动金(No:5)

年　　份：2008

卷　　号：27

期　　号：2

起止页码：97-101

语　　种：中文

收录情况：普通刊

摘　　要：目的:研究腺病毒载体介导人内皮型一氧化氮合酶(human endothelial nitric oxide synthase,heNOS)和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)在体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymalstem cells,MSCs)的表达。方法:体外培养、扩增大鼠骨髓间充质干细胞,并对培养的细胞进行成骨、成脂肪诱导分化和细胞免疫表型鉴定;用Pme I线性化后去磷酸化的pShuttle-heNOS-EGFP转化含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的感受态BJ 5183,使其在细菌内发生同源重组,获得阳性重组质粒pAdEasy-heNOS-EGFP。重组质粒经PCR、酶切和测序鉴定正确后经PacⅠ酶切,转入AD 293细胞,包装成重组腺病毒Ad-heNOS-EGFP。用重组腺病毒Ad-heNOS-EGFP对MSCs进行转染,并用荧光显微镜及免疫荧光染色法观察转染细胞内EGFP和heNOS蛋白质的表达。结果:pShuttle-heNOS-EGFP与pAdeasy-1在BJ 5183中成功地发生了同源重组,得到了重组腺病毒质粒pAdEasy-heNOS-EGFP。重组质粒在AD 293细胞中包装成重组腺病毒Ad-heNOS-EGFP。经基因转染的MSCs中高表达heNOS和EGFP。结论:采用腺病毒载体可以将外源性的heNOS基因转染至MSCs中,并得到有效表达,且携带的EGFP标记可以直观地检测靶细胞感染和外源基因的表达情况,这将为勃起功能障碍的细胞治疗提供一条新的途径。

关 键 词：人内皮型一氧化氮合酶  增强型绿色荧光蛋白 腺病毒载体 间充质干细胞

分 类 号：Q78]