文献类型：期刊文章

作　　者：申明霞[1] 刘涛[2] 杜丽[2] 王凤阳[2] 成鹰[2] 许世英[3] 吴科榜[2] 李治深[2] 符运南[3] 林贤梅[3] 满初日嘎[2] 祁超[1]

机构地区：[1]华中师范大学生命科学学院,湖北武汉430079 [2]海南大学农学院海口市动物基因工程重点实验室,海南海口570228 [3]海南大田国家级自然保护区,海南东方572600

出　　处：《生物技术》

基　　金：国家自然科学基金项目(30560021);海南省自然科学基金项目(30509);海南省教育厅高校科研项目(Hj200609);海南大学校科研基金项目资助

年　　份：2008

卷　　号：18

期　　号：2

起止页码：5-8

语　　种：中文

收录情况：CAS、CSCD、CSCD_E2011_2012、JST、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的:构建海南坡鹿外周血白细胞cDNA文库。方法:采用RNAiso Reagent(TAKARA)处理新鲜血液,以总RNA抽提试剂盒(上海华舜)制备总RNA。利用SMART(Switching Mechanismat5’end of RNA Transcript)技术,用PowerscriptTM反转录酶逆转录合成第一链cDNA,LD-PCR扩增获得cDNA双链,SfiⅠ酶切和CHROMA SPIN-400TM柱分级分离后,500bp以上的片段与pDNR-LIB载体连接,电转化入E.coliDH5α,建成原始文库。然后扩增文库并随机挑取单菌落,酶切鉴定重组子插入片段大小。结果:经鉴定,库容量达到1.9×106克隆,原始文库滴度为1.59×1010cfu/mL,重组率接近100%,扩增后的文库滴度为7.4×1012cfu/mL。插入片段大小分布为0.5～2.0kb,平均长度约为1.0kb。结论:所构建文库的各项指标均达到要求,为筛选海南坡鹿已知和未知功能基因提供了材料来源,且为进一步研究基因的结构和功能奠定了重要基础。

关 键 词：海南坡鹿 外周血白细胞 CDNA文库 SMART技术

分 类 号：Q785]