文献类型：期刊文章

作　　者：刘萍[1] 夏立秋[1,2] 胡胜标[1] 严礼[1] 丁学知[1] 张友明[1] 喻子牛[2]

机构地区：[1]湖南师范大学生命科学学院,微生物分子生物学湖南省重点实验室,长沙410081 [2]华中农业大学,农业微生物学国家重点实验室,武汉430070

出　　处：《微生物学报》

基　　金：国家自然科学基金(30570050,30670052);国家“863计划”(2006AA02Z187,2006AA10A212);国家博士点基金项目(20060542006)~~

年　　份：2008

卷　　号：48

期　　号：5

起止页码：661-666

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2004、BIOSISPREVIEWS、CAS、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2011_2012、IC、JST、PROQUEST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：【目的】研究构建稳定表达外源基因、无抗性标记基因的苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)工程菌的方法。在构建Bt工程菌时,高拷贝外源质粒的转入导致Bt芽孢数量减少,芽孢形成期延滞,影响Bt菌株的杀虫活力。而且,外源质粒在Bt中的稳定性较差,外源基因容易丢失。将基因整合入染色体是一种构建遗传性状稳定、杀虫活力高的Bt工程菌的有效方法。【方法】本研究采用PCR技术,分两段扩增定位于Bt无晶体突变株XBU001染色体上的trigger factor基因片段作为同源臂,克隆入温度敏感型载体pKSV7,构建了定点整合载体pKTF12。并利用pKTF12质粒将cry1Ac基因定点整合入XBU001染色体上。【结果】利用载体pKTF12将cry1Ac定点插入triggerfactor位点,对宿主菌XBU001的正常生长没有影响。重组菌株KCTF12中的cry1Ac基因能够稳定遗传、表达并形成菱形晶体。与携带高拷贝外源质粒的Bt菌株HTX42相比较,KCTF12具有芽孢数量增多、芽孢形成期提前的优势。【结论】定点整合法是一种构建稳定表达外源基因、无抗性标记基因Bt工程菌的有效方法。

关 键 词：苏云金芽孢杆菌 定点整合  同源重组 pKSV7  triggerfactor基因  CRY1AC基因

分 类 号：S476.11]