文献类型：期刊文章

作　　者：柴玉荣[1] 田芳[1] 刘红涛[1] 李杰[1] 薛乐勋[1]

机构地区：[1]郑州大学细胞生物学研究室

出　　处：《中国生物工程杂志》

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30540067)

年　　份：2008

卷　　号：28

期　　号：4

起止页码：47-52

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2004、CAB、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、IC、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：为提高转基因盐藻的表达效率,利用基因组步行方法和巢式PCR,从盐藻中克隆了1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(rubisco)的小亚基基因rbcS的5′上游调控序列,并对其进行序列分析和转基因功能分析。采用DraI、EcoR V、PvuII和StuI4种平端限制内切酶分别酶切盐藻基因组DNA,并与接头连接,构建基因组步行文库GWL1、GWL2、GWL3和GWL4;设计特异引物从这4种文库中扩增rbcS基因的5′上游调控序列。在GWL1、GWL4中分别扩增出约1.2kb的片段。对该序列的分析表明,它的3′端与已知盐藻rbcScDNA的5′端序列完全一致,说明是该基因的5′端上游区,并且包含多个与转录调控有关的保守序列(如TATA-box,CAAT-box),富含GT的重复序列。此序列EcoR I下游的片段与除草剂抗性基因bar相融合,构建表达载体,电击法转化盐藻。通过对转化藻株的抗性筛选以及PCR和Southern blot检测,表明该区域能驱动外源基因bar在转基因盐藻中的表达,推断是盐藻rbcS基因的启动子调控区。

关 键 词：盐藻 I,  5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶  RBCS 启动子

分 类 号：Q786]