文献类型：期刊文章

作　　者：徐钰[1] 孙钧铭[2] 张莲芬[1] 窦文芳[1] 李洁[1] 朱威[1] 朱书峰[1] 金坚[1]

机构地区：[1]江南大学生物工程学院生物制药系工业生物技术教育部重点实验室,江苏无锡214122 [2]无锡第三人民医院中心实验室,江苏无锡214041

出　　处：《药物生物技术》

基　　金：国家"863"计划项目(2006AA02Z153);上海市科委生物医药重大科技攻关项目(06DZ19020);2006江苏省卫生厅科研项目(Z200611)

年　　份：2008

卷　　号：15

期　　号：2

起止页码：109-114

语　　种：中文

收录情况：AJ、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD_E2011_2012、EMBASE、IC、SCOPUS、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：制备人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)与人血清白蛋白(HSA)的融合蛋白。从新鲜人外周血中分离单核细胞,给予大肠杆菌脂多糖刺激后,RT-PCR制备G-CSF cDNA,以其为模板扩增得到人G-CSF的编码区序列(525 bp)。重叠PCR拼接HSA-GCSF融合基因(2277 bp),序列测定正确,中间未加入任何连接肽。插入表达载体pPIC9K中α交配因子的开放阅读框内,构建分泌型表达重组质粒pPIC9K-HSA-GCSF。电击转化毕赤酵母菌KM71,G418筛选得到高拷贝转化子。甲醇诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE鉴定融合蛋白的相对分子质量约为84 k,Western blot分析融合蛋白为G-CSF与HSA的杂合分子,NFS-60细胞/MTT比色法测定融合蛋白具有G-CSF的生物学活性。结果:构建了可分泌表达HSA-GCSF融合蛋白的毕赤酵母工程菌,为进一步对其进行药学研究奠定了基础。

关 键 词：人粒细胞集落刺激因子 人血清白蛋白 融合蛋白 毕赤酵母

分 类 号：S642.5] Q81]