文献类型：期刊文章

作　　者：张慧丽[1] 杨松[2] 何金萍[1] 胡冰洁[1] 曲方[3] 宋有涛[1]

机构地区：[1]辽宁大学生命科学院,沈阳110036 [2]沈阳军区药品检验所 [3]沈阳军区总医院

出　　处：《中国公共卫生》

基　　金：辽宁省教育厅科技项目(20060358);沈阳市科技局项目(05L156)

年　　份：2008

卷　　号：24

期　　号：4

起止页码：485-487

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2004、CAS、CSCD、CSCD_E2011_2012、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的构建具有天然氮末端的重组鸡半胱氨酸蛋白酶抑制剂(chicken cystatin,cC)在毕赤酵母中高效分泌表达。方法通过设计独特的引物,利用DNA重组技术将cC的cDNA片段插入分泌型酵母表达载体pPICZαA中,构建相应的重组酵母表达质粒pPICZαA-cC,并在巴氏毕赤酵母(Pichia pastoris)菌株X-33中甲醇诱导表达。结果经十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、底物活性SDS-PAGE和Native-PAGE分析,随着不同剂量的β-巯基乙醇和盐酸胍组合处理重组cC,二硫键被破坏的程度加深,5 mol/L盐酸胍与10%β-巯基乙醇的组合几乎完全打开了分子内的二硫键。结论92.9%的重组cC具有二硫键并与天然cC具有相似的木瓜蛋白酶抑制活性。

关 键 词：重组鸡半胱氨酸蛋白酶抑制剂(cC)  天然氮末端  毕赤酵母 类淀粉样特性  二硫键

分 类 号：R338.1]