文献类型：期刊文章

作　　者：王官清[1] 井上直树[2] 野沢直树[2]

机构地区：[1]厦门大学附属中山医院皮肤科,厦门大学医学院临床医学系,361004 [2]日本国立感染症研究所病毒一部

出　　处：《中华微生物学和免疫学杂志》

基　　金：国家自然科学基金资助项目（30671884）;福建省高等学校新世纪优秀人才支持计划资助项目;厦门市卫生局医学科研基金资助项目（WSK0618）

年　　份：2008

卷　　号：28

期　　号：3

起止页码：212-216

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2004、BIOSISPREVIEWS、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、EMBASE、IC、JST、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的利用水痘-带状疱疹病毒（VZV）ORF9启动子的最短有效序列ORF9G和ORF61启动子的最短有效序列ORF61F构建VZV报告细胞系并分析其特性。方法分别将ORF9G和ORF61F自身首尾连接得到串联启动子TgG和T61F，再分别将TgG和T61F克隆到报告子质粒pGL3-basic中构建串联启动子-报告子重组质粒pGL-TgG和pGL-T61F，质粒中报告基因萤火虫荧光素酶的表达由上游串联启动子控制；将pGL-TgG、pGL-T61F分别同G418抗性质粒pCMV-script恒定转染到人黑色素瘤细胞系MeWo后培养至G418抗性细胞克隆生长；收集G418抗性细胞克隆，测定其感染VZV后萤火虫荧光素酶的表达强度，筛选信噪比高的细胞克隆作为VZV报告细胞系，并分析其灵敏度、特异性等主要特性。结果串联启动子TgG和T61F分别较其单拷贝启动子9G和61F活性增加1倍；分别利用pGL-TgG和pGL—T61F成功构建了VZV报告细胞MV9G和MV61F；两个报告细胞在感染最低50PFU VZV 24h时即能检测到萤火虫荧光素酶的强表达，表达强度与感染病毒量呈线性正相关，但感染人巨细胞病毒（HCMV）、人类疱疹病毒6（HHV-6）和HHV-7时无表达；MV9G的灵敏度较MV61F略高。结论MV9G和MV61F均可作为敏感、特异的VZV报告细胞系供进一步研究用。

关 键 词：水痘-带状疱疹病毒 报告细胞系  启动子

分 类 号：R686]