文献类型：期刊文章

作　　者：汤伟[1,2] 杜绍财[1,2] 陶其敏[1,2] 朱凌[1,2]

机构地区：[1]南通医学院附属医院传染科 [2]北京医科大学第二临床学院肝病研究所

出　　处：《新消化病学杂志》

年　　份：1997

卷　　号：5

期　　号：10

起止页码：638-639

语　　种：中文

收录情况：普通刊

摘　　要：目的研究与解决ＰＣＲ检测ＨＣＶＲＮＡ过程中常见的产物污染问题．方法以稀释的含ｄＵＴＰ的ＰＣＲ产物加入ＲＴＰＣＲ反应的不同阶段以模拟ＰＣＲ产物污染，再采用尿苷酶以清除污染的ＰＣＲ产物分子．结果在检测ＨＣＶＲＮＡ的套式ＰＣＲ反应中，假阳性结果主要是由于ＰＣＲ终产物在实验过程中的任何阶段污染所引起，但污染的模板分子仅在第２次ＰＣＲ反应时扩增．将ＨＣＶＲＮＡ套式ＰＣＲ检测试剂盒中的第２次ＰＣＲ反应液中加入一定量的ｄＵＴＰ，可使反应终产物核酸分子上含有ｄＵＴＰ．此后，在每进行第２次ＰＣＲ反应前，均在每３０μｌ反应体系中加入尿苷酶１Ｕ，３７℃消化１ｈ，然后９４℃１０ｍｉｎ灭活尿苷酶，即可降解其中含ｄＵＴＰ的污染核酸分子．结论此法能消除同一实验室内套式ＰＣＲ终产物的污染，防止假阳性结果的出现．

关 键 词：丙型肝炎病毒 RNA 聚合酶链反应 分析  

分 类 号：R373.21]