文献类型：期刊文章

作　　者：罗佶[1] 伍贤进[2] 彭帅[1] 刘选明[1]

机构地区：[1]湖南大学生命科学与技术研究院生物能源与材料研究中心,湖南长沙410082 [2]怀化学院生物工程系,湖南怀化418008

出　　处：《安徽农业科学》

基　　金：国家科技基础条件平台建设项目(2005DKA21006)

年　　份：2008

卷　　号：36

期　　号：3

起止页码：895-897

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2004、CAS、JST、RCCSE、核心刊

摘　　要：[目的]针对翻白草ISSR的反应特点，建立稳定可靠的ISSR分子指纹标记反应体系，为进一步研究翻白草的居群差异奠定基础。[方法]通过筛选引物并设定影响翻白草ISSR反应的诸因子的不同浓度，检测ISSR不同反应体系的扩增效果；通过分析非特异性条带的产生原因并进行条件优化，建立翻白草ISSR稳定可靠的反应体系。[结果]首次建立了可用于翻白草ISSR-PCR分析的最适宜的反应体系，确定了25μl PCR反应体系中各试剂终浓度：1×Buffer缓冲液，1U TaqDNA聚合酶，2．5mmol／LMg^2＋，0．25mmol／LdNTP，0．4μmol／L引物，DNA模板约20～30ng，退火温度在50～56℃；实验表明：Taq酶质量、DNA模板品质、退火温度、Mg^2＋浓度、dNTP浓度均对ISSR反应结果具有较大影响。[结论]所建立的翻白草ISSR反应体系具有标记位点清晰、反应系统稳定、检测多态性能力较强、重复性好等特点，可以较好地应用于翻白草的居群鉴别及居群分子生态的研究。

关 键 词：翻白草 总DNA提取 ISSR—PCR  体系优化  

分 类 号：Q503]