文献类型：期刊文章

作　　者：孙爱华[1] 范兴丽[1] 毛亚飞[2] 彭敏峰[3] 范春红[1] 严杰[2]

机构地区：[1]浙江医学高等专科学校,浙江杭州310053 [2]浙江大学医学院病原生物学系,浙江杭州310058 [3]杭州市中医院检验科,浙江杭州310007

出　　处：《浙江大学学报（医学版）》

基　　金：浙江省医药卫生科研基金(2004A018)

年　　份：2008

卷　　号：37

期　　号：1

起止页码：67-72

语　　种：中文

收录情况：CAS、CSCD、CSCD_E2011_2012、IC、PUBMED、SCOPUS、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的:克隆并构建梅毒螺旋体tpn17、tpn47基因原核表达系统,建立基于rTpN17、rTpN47的ELISAs,并对其用于梅毒血清学诊断的敏感性和特异性进行评价。方法:采用PCR扩增tpn17和tpn47基因并构建tpn17和tpn47基因原核表达系统。采用SDS-PAGE检测目的重组蛋白rTpN17和rTpN47表达情况,Ni-NTA亲和层析法提纯rTpN17和rTpN47,Western blot检测rTpN17和rTpN47免疫反应性。分别以rTpN17和rTpN47为包被抗原,建立检测血清标本中梅毒抗体的ELISAs(rTpN17-ELISA和rTpN47-ELISA),检测200例健康人、25例类风湿关节炎(RA)和17例系统性红斑狼疮(SLE)患者血清样本,并与甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)和梅毒螺旋体间接血凝试验(TPHA)检测效果进行比较。结果:克隆的tpn17和tpn47基因与GenBank中相关序列相似性为100%。rTpN17和rTpN47表达量分别为细菌总蛋白的37.2%和26.8%。提纯后的rTpN17和rTpN47能与梅毒抗体阳性血清发生明显的结合反应。TPHA检测阳性率最高(99.1%,P<0.001),rTpN17-ELISA和rTpN47-ELISA检测阳性率相近(85.3%和84.3%,P=0.427),TRUST检测阳性率低于rTpN17-ELISA(P=0.001),但与rTpN47-ELISA相近(P=0.014)。所有健康人血清、RA和SLE患者血清标本的rTpN17-ELISA、rTpN47-ELISA和TPHA检测结果均为阴性,但有7.1%(3/42)RA和SLE患者血清标本TRUST检测结果阳性。结论:以rTpN17和rTpN47为抗原的ELISAs可作为快速、简便、敏感性和特异性较高的梅毒血清学筛查方法,而且rTpN17和rTpN47仍保持原有免疫反应特异性。

关 键 词：酶联免疫吸附测定/方法  梅毒 密螺旋体 苍白/免疫学  敏感性与特异性  基因表达  抗原 细菌/血液  梅毒血清诊断/方法  免疫显性表位/生物合成  免疫显性表位/遗传学  重组  遗传  

分 类 号：R377]