文献类型：期刊文章

作　　者：王卫东[1] 蒋立新[2] 徐江平[1] 陆兵勋[1]

机构地区：[1]南方医科大学南方医院神经内科,广东广州510515 [2]国家863计划生物领域病毒基因载体研发基地,北京100176

出　　处：《南方医科大学学报》

基　　金：国家自然科学基金(30472178)~~

年　　份：2008

卷　　号：28

期　　号：1

起止页码：30-33

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2004、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、JST、PUBMED、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的构建编码hVEGF165mRNA的shRNA质粒表达载体,并筛选出基因沉默效果最明显的shRNA质粒表达载体。方法以hVEGF165mRNA编码区中第5和第7外显子序列作为RNA干扰靶点,分别构建3个shRNA质粒表达载体和1个阴性对照质粒表达载体并通过PCR进行鉴定。经鉴定后分别转染稳定表达hVEGF165基因的BHK细胞,实时荧光定量PCR和Western blotting分别从mRNA和蛋白质水平检测抑制效果。结果构建的质粒表达载体PCR鉴定均可扩增出预期条带,构建成功。靶向hVEGF165基因的shRNA对所转染稳定表达hVEGF165基因的BHK细胞中hVEGF165基因mRNA和蛋白质表达均有抑制作用,其中shRNA2最为明显。结论成功构建了靶向hVEGF165基因的shRNA质粒表达载体,其中抑制效果最为明显的shRNA质粒表达载体为pDC316-EGFP-U6-shRNA2质粒。

关 键 词：RNA干扰 质粒表达载体  短发卡样RNA  hVEGF165基因  

分 类 号：R346[基础医学类]