文献类型：期刊文章

作　　者：廖洪映[1] 张惠忠[1] 陈波[1] 华平[1] 殷香保[2] 蒙荣森[2] 刘启才[3] 熊利华[1]

机构地区：[1]中山大学附属第二医院心胸外科,广东广州510120 [2]中山大学附属第二医院医学研究中心,广东广州510120 [3]广州医学院医学研究中心,广东广州510182

出　　处：《中山大学学报（医学科学版）》

基　　金：卫生部科研基金(981093)

年　　份：2005

卷　　号：26

期　　号：B03

起止页码：50-53

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2004、CAS、CSA、CSCD、CSCD2011_2012、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：【目的】克隆人类抗凋亡基因 bcl-xL cDNA,构建两种不同的真核表达载体,评价大鼠心肌细胞表达外源性bcl-xL 的效果,并比较不同转染方法对 bcl-xL 表达的影响。【方法]】RT-PCR 法从人肝脏组织获取 bcl-xL cDNA,连接至pTargeT^(TM)载体,并亚克隆至真核表达载体 pEGFP-C1上;细菌内同源重组构建重组腺病毒质粒,腺病毒纯化试剂盒获取高滴度的重组腺病毒;脂质体和腺病毒介导分别转染体外培养的大鼠心肌细胞,荧光显微镜观察转染效率,RT-PCR 和免疫细胞化学染色法检测 bcl-xL mRNA 和 bcl-xL 蛋白的表达。【结果】获取的 bcl-xL cDNA 测序正确,成功克隆真核表达质粒 pEGFP-bcl-xL;病毒颗粒滴度高达5.3×10^(12)pfu/L;脂质体和腺病毒转染心肌细胞效率分别为40.3%和95.4%,转染后bcl-xL mRNA 和 bel-xL 蛋白的表达均增加,但两种方法之间差异有统计学意义(P<0.01)。【结论】成功获取人类 bcl-xL基因并制备真核表达质粒和重组腺病毒,心肌细胞能高效表达外源性 bcl-xL,并以腺病毒介导更为理想。为 bcl-xL 基因治疗缺血性心脏病提供实验基础。

关 键 词：基因,bcl-xL  克隆 载体构建  心肌细胞  基因疗法

分 类 号：R78[口腔医学类] R363[临床医学类]