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副溶血弧菌LAMP检测方法的建立
Development of Loop-mediated Isothermal Amplification (LAMP) Method for Detection of Vibrio parahaemolyticus
文献类型:期刊文章
机构地区:[1]上海水产大学食品学院,上海200090
基 金:上海市科技兴农重点攻关项目(沪农科攻字2005第4-2号);上海市重点学科建设项目(T1102);上海高校选拔培养优秀青年教师科研专项基金资助项目(K07-25)
年 份:2007
卷 号:27
期 号:12
起止页码:66-72
语 种:中文
收录情况:BDHX、BDHX2004、CAB、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、IC、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊
摘 要:副溶血弧菌(Vibrioparahaemolyticus)是一种能引起食源性疾病的重要病原菌。首次将一种新颖的核酸扩增技术-环介导等温扩增技术(loop-mediatedisothermalamplification,LAMP)应用于副溶血弧菌的快速检测。针对副溶血弧菌不耐热溶血毒素基因(tlh)设计4条特异性引物(两条内引物和两条外引物)进行LAMP扩增,对扩增反应进行优化,最佳反应时间为60min,反应温度为60℃。对12种细菌共28株菌进行LAMP扩增,仅14株副溶血弧菌得到阳性扩增结果,证明引物具有很高的特异性。副溶血弧菌基因组DNA和纯培养物的检测灵敏度分别约为90fg和24cfu/ml。对模拟食品样品进行直接检测,检测限为89cfu/g。结果表明,该方法检测副溶血弧菌特异性强、灵敏度高,并且操作简便、检测成本低,1小时即可完成,有望发展成为快速检测副溶血弧菌的有效手段。
关 键 词:副溶血弧菌 环介导等温扩增技术(LAMP) 不耐热溶血毒素基因(tlh) 检测
分 类 号:Q93]
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