文献类型：期刊文章

作　　者：王卫东[1] 陈长生[2] 蒋立新[3] 陆兵勋[1]

机构地区：[1]南方医科大学附属南方医院神经内科,广东广州510515 [2]第四军医大学卫生统计学教研室,陕西西安710033 [3]国家863计划生物领域病毒基因载体研发基地,北京100176

出　　处：《第四军医大学学报》

年　　份：2007

卷　　号：28

期　　号：22

起止页码：2025-2028

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2004、CAB、IC、ZR、核心刊

摘　　要：目的:构建并制备携带靶向干扰VEGF165基因shRNA的重组腺相关病毒载体.方法:将PCR法扩增所得EGFP-U6-shRNA(VEGF165)片段插入载体质粒pSNAV2.0-lacz-α的EcoRI和SalI酶切位点,构建重组质粒pSNAV2.0-EGFP-U6-shRNA(VEGF165).以HSV1-RapCap/ΔUL2为辅毒,包装rAAV2-EGFP-U6-shRNA(VEGF165)病毒.对所获病毒载体进行PCR,SDS-PAGE鉴定分析、滴度测定和EGFP的活性检测.结果:PCR,SDS-PAGE鉴定分析结果表明靶向干扰VEGF165基因的shRNA片段成功包装入重组AAV2载体,病毒纯度在98%以上.点杂交法测定重组病毒载体基因组滴度约为3×1014v.g.(vector genomes)/L.EGFP活性检测显示重组AAV2感染细胞阳性率在30%以上.结论:成功制备了rAAV2-EGFP-U6-shRNA(VEGF165)病毒载体,为通过RNA干扰技术特异性抑制VEGF基因的表达来阐明VEGF在缺血性脑损伤后各种生物学事件中的作用奠定了实验基础.

关 键 词：血管内皮生长因子类 腺相关病毒 遗传载体  RNA干扰  短发卡样RNA  

分 类 号：R743.32] Q782[临床医学类]