文献类型：期刊文章

作　　者：孙毅[1] 贾人初[1] 刘金明[1] 苑纯秀[1] 石耀军[1] 陆珂[1] 傅志强[1] 孙焕[1] 蔡幼民[1] 林矫矫[1]

机构地区：[1]中国农业科学院上海兽医研究所,国家防治动物血吸虫病专业实验室,农业部动物寄生虫学重点开放实验室,上海200232

出　　处：《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》

基　　金：上海市科学技术委员会科研计划项目(No.054909002);科技部自然资源平台项目(No.2005DKA21104)~~

年　　份：2007

卷　　号：25

期　　号：5

起止页码：406-410

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2004、CAB、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、ZR、核心刊

摘　　要：目的构建日本血吸虫成虫T7噬菌体展示cDNA文库。方法用Trizol试剂提取日本血吸虫成虫总RNA,分离纯化mRNA,经随机引物反转录合成双链cDNA。在双链cDNA末端加上定向EcoRⅠ/HindⅢ接头,再用EcoRⅠ和HindⅢ消化,使其成为两端分别带有EcoRⅠ和HindⅢ粘性末端的双链cDNA。收集300bp以上的双链cDNA片段,与T7Select 10-3b载体连接,经体外包装后,以大肠埃希菌BLT5403为宿主菌构建T7噬菌体展示cDNA文库。通过滴度测定及PCR技术鉴定文库质量,用7种特异性引物以PCR法从文库中钓取目的基因以检测文库的代表性。结果原始文库的库容量为4.98×106pfu,扩增后文库滴度为3.85×1011pfu/ml。对随机挑取的96个噬菌斑进行PCR鉴定,重组率为93.8%,其中95.6%的插入片段大于300bp。7种特异性引物均能从文库中钓取到日本血吸虫成虫相关基因。结论构建了日本血吸虫成虫T7噬菌体展示cDNA文库。

关 键 词：日本血吸虫 噬菌体展示cDNA文库  成虫

分 类 号：R383.24] R392.1[基础医学类]