文献类型：期刊文章

作　　者：蔡成郁[1] 白羽[1] 刘志刚[1] 吉坤美[1]

机构地区：[1]深圳大学过敏反应与免疫学研究所,深圳518060

出　　处：《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》

基　　金：国家863高技术研究发展计划(No.2002AA214011);国家自然科学基金(No.30271226)~~

年　　份：2007

卷　　号：25

期　　号：1

起止页码：22-26

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2004、CAB、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、ZR、核心刊

摘　　要：目的克隆表达粉尘螨3类变应原(Der f 3)基因,并鉴定纯化蛋白的变应原性。方法取华南地区采集经实验室培养的粉尘螨(约500只)提取总RNA,经RT-PCR扩增Der f 3基因。将目的基因克隆到pET-His表达载体上得到重组质粒pET-Der f 3。大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导培养,表达Der f 3目的蛋白。重组rDer f 3蛋白经6His-tag蛋白纯化系统进行分离、纯化,蛋白质印迹法(Western blotting)分析该纯化Der f 3蛋白与粉尘螨过敏患者血清IgE反应性,以鉴定重组Der f 3的变应原性。结果以粉尘螨总RNA为模板克隆出Der f3基因,该基因与GenBank (D63858)公布的Der f3比较有4个核苷酸差异,但同源性为99.5%。E.coliBL21(DE3)经IPTG诱导后高效表达Der f 3重组蛋白,主要以包涵体形式存在。经Western blotting分析该重组蛋白Der f 3能与粉尘螨过敏患者血清的IgE反应,而不与健康者血清IgE反应。结论构建了华南地区粉尘螨3类变应原的原核表达载体,并高效表达和纯化出具变应原性的Der f3重组蛋白。

关 键 词：粉尘螨 Der  F 3  变应原 原核表达 鉴定  

分 类 号：R757.3]