文献类型：期刊文章

作　　者：张石柱[1] 王中康[1] 彭国雄[1] 曹月青[1] 殷幼平[1] 谢磊[1] 刘静[1] 夏玉先[1]

机构地区：[1]重庆大学生物工程学院基因工程研究中心重庆市杀虫真菌农药工程技术研究中心功能基因及调控技术重庆市重点实验室,重庆400030

出　　处：《农业生物技术学报》

基　　金：国家自然科学基金(No.30170630);重庆市重点自然科学基金(No.8564)资助

年　　份：2007

卷　　号：15

期　　号：5

起止页码：884-887

语　　种：中文

收录情况：CAB、CAS、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2011_2012、JST、RCCSE、UPD、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：为高效获得与绿僵菌产孢相关的全长cDNA,采用DSN(duplex-specific nuclease)均一化技术与SMARTTM(switching mechanism at 5′end of RNA transcript)建库技术相结合的方法,构建了杀虫真菌金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae var.acridum)菌株CQMa102产孢时期的均一化全长cDNA文库。经检测,原始文库滴度为2.1×106cfu/mL,库容量超过6×106。随机挑取100个克隆,PCR方法测得文库重组率大于95%,插入片段平均长度1500bp。小规模测序分析表明,全长基因的比例超过60%。对组成性表达基因3-磷酸甘油醛脱氢酶G3PDH和微管蛋白β-tubulin均一化前后丰度检测表明,其丰度均有大幅度的下降,基本满足节约筛库的要求。

关 键 词：绿僵菌 产孢基因  全长文库  均一化技术  switching  mechanism  at  5'end  of  RNA  transcrip(tSMART^TM)  duplex-spe-cific  nuclease(DSN)  

分 类 号：S188]