文献类型：期刊文章

作　　者：金龙金[1] 张春玲[1] 楼哲丰[2] 张李雅[3] 陈林丽[1] 李玮[1] 吕建新[1]

机构地区：[1]温州医学院生命科学学院,浙江省医学遗传学重点实验室 [2]温州医学院生命科学学院,生物学实验中心 [3]温州医学院附属第一医院生殖医学中心,温州325035

出　　处：《细胞生物学杂志》

基　　金：浙江省自然科学基金(No.Y206582);温州市科技发展计划项目(No.Y20060063)资助~~

年　　份：2007

卷　　号：29

期　　号：4

起止页码：573-578

语　　种：中文

收录情况：CSCD、CSCD2011_2012、普通刊

摘　　要：为了检测弱精子症精子mtATPase6基因突变,采用PCR方法扩增了17例弱精子症mtDNA8602～9416区域815bp目的片段,用MspI和HaeⅢ限制性内切酶酶切,分别用琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳和单链构像多态性(SSCP)筛查突变。筛选出3例突变标本,经测序确认突变位点和突变性质。结果显示17例标本全部扩增出mtDNA8602～9416的815bp目的片段,PCR产物经MspI限制性内切酶酶切后电泳结果与剑桥序列预期酶切图谱相一致。PCR产物经HaeⅢ酶切,聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱上出现泳动带的异常,在17例弱精子症中共筛选出2例酶切片段异常标本。PCR-HaeⅢ酶切产物的SSCP电泳图谱分析结果显示,在PCR-RFLP(HaeⅢ)电泳图谱正常的15例弱精子症标本中筛选出1例异常。两种方法在弱精子症精子标本中筛选出mtATPase6基因突变3例(3/17,17.7%)。3例测序结果发现A8701G、C8943T、C8964T、T8966C、G9053A、C9060A、C9075T、A9120G、C9296T共9个点突变,其中A8701G、T8966C、G9053A三个突变为错义突变,其余均为同义突变。上述结果提示,弱精子症精子mtATPase6基因存在较高突变率;PCR-RFLP和PCR-SSCP能简单、快速、灵敏地筛选mtATPase6基因突变。

关 键 词：弱精子症 mtATPase6  点突变 PCR-RFLP PCR-SSCP

分 类 号：R698.2]