文献类型：期刊文章

作　　者：贾人初[1,2] 孙毅[2] 刘金明[2] 苑纯秀[2] 傅志强[2] 石耀军[2] 陆珂[2] 孙焕[2] 李浩[2] 蔡幼民[2] 林矫矫[2]

机构地区：[1]上海师范大学生命与环境科学学院,上海200234 [2]中国农业科学院上海兽医研究所,国家防治动物血吸虫病专业实验室,农业部动物寄生虫学重点开放实验室

出　　处：《中国血吸虫病防治杂志》

基　　金：科技部自然资源平台项目(2005DKA21104);上海市科学技术委员会科研计划项目(054909002)

年　　份：2007

卷　　号：19

期　　号：4

起止页码：252-256

语　　种：中文

收录情况：CAB、CAS、CSCD、CSCD_E2011_2012、EMBASE、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、ZR、普通刊

摘　　要：目的构建东方田鼠肺脏T7噬菌体展示cDNA文库,为筛选东方田鼠抗血吸虫感染抗性相关基因奠定基础。方法用TRIzol试剂提取东方田鼠肺脏总RNA,分离纯化mRNA,经反转录合成双链cDNA。在双链cDNA末端加上定向EcoR Ⅰ/Hind Ⅲ接头并用EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ消化,使其两端分别带EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ黏性末端。用Mini Column纯化,收集300bp以上的双链cDNA片段,再连接于带有EcoR和Hind末端的T7 Select 10-3b载体,经体外包装后,以BLT5403为受体菌构建T7噬菌体展示cDNA文库。结果经测定,库容量为1.5×106pfu,扩增后文库滴度为1.1×1012pfu/ml。对从原始文库中随机挑取的100个噬菌斑进行PCR鉴定,重组率为91%,阳性克隆片段长度分布在200-1500bp,其中有90%的插入片段〉300bp。结论成功构建了东方田鼠肺脏T7噬菌体展示cDNA文库。

关 键 词：日本血吸虫 T7噬菌体展示cDNA文库  东方田鼠 肺脏

分 类 号：R383.24]