文献类型：期刊文章

作　　者：高斌[1] 肖白[1] 邹起练[2] 黄尚志[3] 王立荣[3] 钮淑兰[4] 闫梅[1] 雷箴[1] 贾兴元[1] 王战勇[1] 袁海昕[1] 吴燕[1] 刘敬忠[1]

机构地区：[1]首都医科大学附属北京朝阳医院基础医学研究中心,北京100020 [2]福建医科大学细胞生物学与遗传学系,福州350004 [3]中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学遗传室,北京100005 [4]北京大学第一医院中心实验室,北京100034

出　　处：《遗传》

基　　金：北京市自然科学基金资助项目(编号:JS96004)资助~~

年　　份：2007

卷　　号：29

期　　号：8

起止页码：934-938

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2004、BIOSISPREVIEWS、CAB、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、EMBASE、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：为了建立一种基于多重实时荧光相对定量PCR技术并应用之于唐氏综合征分子诊断,选择21号染色体上唐氏综合征特异区域基因片段(DSCR3)为目的基因,以12号染色体上的磷酸甘油醛脱氢酶基因(GAPDH)为参照基因,设计合成两对引物以及分别以不同荧光标记的TaqMan探针,在同一个反应管中进行扩增。以相对定量指标△CT值区分唐氏综合征患者与正常人。采用EB病毒转化技术,把唐氏综合征患者外周血B淋巴细胞转化成永生淋巴母细胞系作为标准品。通过优化反应条件,使得目的基因和参照基因的扩增效率基本一致,接近100%,模板浓度在3～300ng/μL范围内,△CT值的变异系数小于15%,浓度在30ng/μL时,变异系数最小(<10%),以该浓度的DNA作为模板进行批内和批间实验的△CT值重复性好,变异系数分别为9.8%和13.3%。运用建立的方法检测20例唐氏综合征患者的血标本和30例正常人的血标本,正常人△CT值范围是-1.90～-1.30,患者的△CT值范围是-2.95～-2.15,两组之间无交叉重叠,有明显差异(P<0.001)。唐氏综合征患者永生细胞系建系成功,染色体核型和DNA分析表明建系前后遗传是稳定的。因此,实时荧光定量PCR比较△CT值的相对定量法快速诊断唐氏综合征是可行的。

关 键 词：唐氏综合征 荧光定量PCR 相对定量  △CT值  永生细胞系

分 类 号：R450] R714.5[临床医学类]