文献类型：期刊文章

作　　者：李昌[1] 王宏[2] 金宁一[1] 金洪涛[1] 刘玉生[1] 于芳[1] 李子健[1] 张立树[1]

机构地区：[1]军事医学科学院军事兽医研究所全军基因工程重点实验室 [2]暨南大学生命科学技术学院,广州510632

出　　处：《高等学校化学学报》

基　　金：吉林省科学技术厅科研基金(批准号:20060570)资助

年　　份：2007

卷　　号：28

期　　号：8

起止页码：1493-1496

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2004、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、EI(收录号：20073910834905)、IC、JST、RCCSE、RSC、SCIE、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：以酵母分泌型表达载体pPIC9k为基础,通过一段柔性连接肽Linker构建含有人源化抗HIV-1 gp41单链抗体(ScFv41)和免疫诱导因子葡萄球菌肠毒素A(staphylococcal enterotoxinA,SEA)的融合表达质粒pPIC9k-SL41,线性化后,采用电转化法整合入巴斯德菌毕赤酵母GS115中,经His+MutS表型鉴定、PCR分析以及G418筛选获得高拷贝重组转化子.摇瓶培养、甲醇诱导表达、SDS-PAGE和Western Blot分析结果表明,目的蛋白得到良好表达,表达量最高可达到47.9 mg/L.目的蛋白经初步纯化后,用于制备的HIV-1感染靶细胞复制模型进行抗体亲和力测定、细胞结合活性测定和细胞杀伤活性研究,结果显示,目的蛋白能够很好地与靶细胞模型中的HIV-1外膜蛋白gp160发生结合反应,并可介导特异的CTL反应,对靶细胞具有明显的杀伤活性,表明获得了具有生物活性的抗HIV-1重组导向制剂.

关 键 词：HIV-1 重组导向制剂  单链抗体 金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)  分泌表达 毕赤酵母

分 类 号：O629.73] Q511[化学类]