文献类型：期刊文章

作　　者：郭建巍[1] 王顺涛[2] 郭黎明[2] 冯健男[2] 马骢[1] 沈倍奋[2]

机构地区：[1]海军总医院检验科,北京100037 [2]军事医学科学院基础医学研究所分子免疫学实验室,北京100850

出　　处：《免疫学杂志》

基　　金：国家"863"国家高技术研究发展计划项目(2004AA002020);中国博士后基金项目(2004035289)资助

年　　份：2007

卷　　号：23

期　　号：4

起止页码：424-428

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2004、CAB、CAS、CSA、CSCD、CSCD2011_2012、IC、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的 实现重组蓖麻毒素A链（rRTA）的高效表达,获得rRTA的单克隆抗体,建立基于单抗的蓖麻毒素检测方法.方法 用计算机辅助设计的RNA二级结构预测和偏性密码子等手段设计引物 用PCR将rRTA基因克隆至载体pE132a（＋） 用双酶切和DNA测序技术对构建的载体进行鉴定 IFTG诱导rRTA原核表达载体pET32a（＋）/rRA/BL21,用镍离子亲和层析纯化,ELISA及Western blot鉴定rRTA蛋白 rRTA免疫Balb/c小鼠,建立杂交瘤细胞株,获得抗rRTA的单克隆抗体,用Westem blot鉴定.结果 构建了rRTA原核表达载体pET32a（＋）/rRA/BL21,实现了rRTA在大肠杆菌BL21中的高效可溶性表达,获得了高纯度约10～20 mg/L rRTA 获得抗rRTA的单克隆抗体 建立的ricin EIJSA检测方法检出ricin的最低浓度为3.125 ng/mL,目视比色对蓖麻毒素的最低检出浓度为6.25 ng/mL.结论 本研究表达的rRTA及其单克隆抗体和基于单抗的ricin检测方法,将在肿瘤生物治疗、ricin生物恐怖袭击的侦检、治疗和预防中发挥重要作用.

关 键 词：蓖麻毒素 蓖麻毒素A链 融合蛋白 夹心EIJSA  

分 类 号：R392.11]