文献类型：期刊文章

作　　者：侯筱宇[1] 高锦[1]

机构地区：[1]徐州医学院江苏省脑病生物信息重点实验室,江苏徐州221002

出　　处：《徐州医学院学报》

基　　金：国家自然科学基金(30300069);教育部新世纪优秀人才支持计划基金(NCET-04-0520)

年　　份：2007

卷　　号：27

期　　号：6

起止页码：351-354

语　　种：中文

收录情况：CAS、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的构建突变型PSD-95的重组表达质粒(Y432F、Y439F、Y523F和Y533F,酪氨酸突变为苯丙氨酸),并在COS-7细胞中表达。方法以野生型PSD-95-pcDNA3.1为模板,采用重叠延伸PCR法获得突变型PSD-95的局部或全长cDNA片段,并克隆至PSD-95-pcDNA3.1或pcDNA3.1载体;以脂质体法将构建好的重组质粒转染COS-7细胞;通过免疫印迹法鉴定PSD-95及其突变体的表达。结果限制性内切酶酶切和测序结果表明,扩增出的突变型PSD-95基因完全正确。免疫印迹显示,转染的突变型重组质粒在相对分子质量9.5×104处均有相应条带出现。结论成功构建了4个PSD-95酪氨酸残基突变体的真核表达质粒,重组质粒在COS-7细胞中高效表达。

关 键 词：PSD-95 基因突变  重叠延伸PCR COS-7细胞 真核表达 载体  

分 类 号：Q78]