文献类型：期刊文章

作　　者：王学海[1] 毛亚飞[1,2] 严杰[1,2]

机构地区：[1]浙江大学医学院病原生物学系,杭州310031 [2]卫生部浙江大学传染病重点实验室

出　　处：《中华微生物学和免疫学杂志》

年　　份：2007

卷　　号：27

期　　号：5

起止页码：432-437

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2004、BIOSISPREVIEWS、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、EMBASE、IC、JST、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的 筛选幽门螺杆菌（Hp）尿素酶B亚单位（UreB）分子中的抗原表位，为研制多抗原肽（MAP）疫苗奠定基础。方法 采用生物信息学技术对UreB的T细胞和B细胞表位进行预测和分析。构建ureB基因原核表达系统，Ni-NTA亲和层析法提纯目的重组表达产物rUreB，常规皮内免疫法制备兔抗血清。选择UreB主要T细胞和B细胞联合表位肽并构建其噬菌体展示系统，PEG／NaCl沉淀法提纯重组噬菌体，SDS-PAGE鉴定目的重组PⅢ蛋白（rPⅢ）。分别以商品化抗跏全菌IsG和rUreB抗血清为一抗，采用Western blot对上述表位肽进行鉴定和筛选。结果 与GenBank中相关序列比较，所克隆的ureB基因核苷酸和氨基酸相似性分别为96％～99．5％和96％～100％。rUreB表达量约为细菌总蛋白的52％，提纯后仅见单一蛋白条带。预测的4个主要表位肽UreB230、UreB322、UreB479和UreB527在M13噬菌体中获得成功表达，采用不同一抗的Westernblot均显示相似的阳性结果，但UreB322和UreB527反应强度明显高于UreB230和UreB479。结论 本研究成功地构建ureB基因高效原核表达系统和UreB主要T细胞和B细胞联合表位肽噬菌体展示系统。所采用的生物信息学技术可有效地预测抗原表位。UreB322和UreB527是UreB有效抗原表位，可作为幽门螺杆菌MAP疫苗的候选表位。

关 键 词：幽门螺杆菌 尿素酶B亚单位基因  原核表达  抗原表位预测 噬菌体展示 B细胞表位 T细胞表位

分 类 号：R686]