文献类型：期刊文章

作　　者：马涛[1] 李鼎锋[2] 傅晶晶[2] 李亮助[1] 孙茂盛[1] 刘勇[2] 邵一鸣[2]

机构地区：[1]中国医学科学院中国协和医科大学医学生物学研究所分子生物学实验室,昆明650118 [2]中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心传染病防治国家重点实验室,北京100050

出　　处：《中国生物制品学杂志》

基　　金：国家高技术研究发展计划(863计划;2003AA219100);美国NIH"中国综合性艾滋病研究项目"(CIPRA;1U19AI51915-02).

年　　份：2007

卷　　号：20

期　　号：5

起止页码：318-321

语　　种：中文

收录情况：AJ、BIOSISPREVIEWS、CAB、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2011_2012、EMBASE、IC、JST、RCCSE、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的原核表达HIV-1CN54调控蛋白Nef,并进行纯化、复性及鉴定。方法将CN54 Nef基因克隆至pThio-HisA载体,构建非融合表达载体,转化大肠杆菌BL21 Codonplus-RIL,IPTG诱导表达,通过尿素梯度洗涤包涵体纯化Nef蛋白,透析复性。Western blot检测目的蛋白的特异性。结果Nef蛋白以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白的40%以上。用尿素洗涤法可直接纯化Nef,纯度达到90%以上。Nef蛋白透析后溶解于PBS缓冲液中。Western blot检测显示了良好的特异性。结论HIV-1 CN54 Nef抗原蛋白可在大肠杆菌中高效表达,采用的纯化和复性Nef蛋白的工艺简便、快捷,为开发针对Nef基因的HIV-1疫苗奠定了基础。

关 键 词：HIV-1/CN54  NEF蛋白 DNA疫苗 原核表达

分 类 号：R392.33] R512.91[基础医学类]