文献类型：期刊文章

作　　者：武正华[1] 唐晓波[1] 王志刚[1] 纪宏宇[2] 于磊[1] 刘慧文[3] 朱大岭[1,4]

机构地区：[1]哈尔滨医科大学药学院生物制药学教研室 [2]哈尔滨医科大学附属二院药学部 [3]哈尔滨医科大学基础医学院组织与胚胎学教研室 [4]哈尔滨医科大学黑龙江省生物医药工程重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地,黑龙江哈尔滨150086

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》

基　　金：中国人类肝脏蛋白质组计划(2004BA711A20);黑龙江省科技厅科技攻关项目(230103550116131);黑龙江省教育厅科学技术研究项目(10551158)

年　　份：2007

卷　　号：23

期　　号：2

起止页码：148-151

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2004、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、EMBASE、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的制备鼠抗人羧酸酯酶-Ⅱ(humancarboxyles-terases-Ⅱ,hCE-Ⅱ)单克隆抗体(mAb)并对其特性进行鉴定。方法以含hCE-Ⅱ的人肝脏微粒体蛋白混合抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备鼠抗hCE-Ⅱ的mAb,并用Protein-G亲和层析法纯化mAb。用间接ELISA法测定mAb的效价,以Westernblot鉴定mAb的特异性、免疫组化染色法对mAb相应的抗原进行组织定位。用免疫沉淀和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assistedlaserdesorption/ionizationtime-of-flightmassspectrometry,MALDI-TOF-MS)得到相应的肽质量指纹谱(peptidemassfingerprint,PMF),再通过Mascot在人类蛋白质数据库中分析比对鉴定mAb对应的抗原。结果获得1株可持续、稳定分泌抗hCE-Ⅱ的mAb的杂交瘤细胞系。杂交瘤细胞分泌的mAbIg的亚类(型)为IgG1(κ),腹水mAb的效价达1×10-7。Westernblot分析显示,在Mr为62000处有1条清晰的带。免疫组化染色显示,该mAb可与肝细胞的浆蛋白结合(hCE-Ⅱ存在于肝细胞浆内微粒体),而不与血管平滑肌细胞内的蛋白结合。该mAb免疫沉淀物的Mr为62000,与hCE-Ⅱ的Mr相符。对免疫沉淀的蛋白质进行质谱鉴定证实,该mAb对应的抗原为hCE-Ⅱ。结论制备出的鼠抗hCE-Ⅱ的mAb效价高、特异性良好,为进一步研究hCE-Ⅱ的功能及其在肝癌等癌症的诊断和治疗中的作用提供了工具。

关 键 词：人羧酸酯酶-Ⅱ  单克隆抗体 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱

分 类 号：R392.11]