文献类型：期刊文章

作　　者：杨晓芳[1] 赵培[2] 李虹[1] 李婉宜[1] 庄永华[1] 蒋忠华[1] 李明远[1]

机构地区：[1]四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室,四川成都610041 [2]中国协和医科大学医药生物技术研究所药物筛选实验室,北京100050

出　　处：《西部医学》

年　　份：2007

卷　　号：19

期　　号：3

起止页码：350-352

语　　种：中文

收录情况：JST、RCCSE、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的研究重组质粒pSIREN/PB1在鸡胚尿囊液中干扰甲型流感病毒复制的效果。方法设计1对编码PB1siRNA的寡核苷酸序列,经退火互补形成双链,再克隆至带有U6启动子的RNAi ready pSIREN-shuttle线性化载体,转化大肠杆菌JM109感受态细胞,双酶切和测序鉴定重组质粒pSIREN/PB1。大量提取重组质粒pSIREN/PB1,用脂质体进行包裹后,按每只鸡胚90μg质粒量接种于10日龄鸡胚尿囊腔,4血凝单位甲型流感病毒液分别于质粒接种后0h、24h、48h接种于鸡胚尿囊腔,流感病毒接种48h后收集无色澄清尿囊液进行血凝实验检测流感病毒效价。结果甲型流感病毒PB1基因的siRNA编码序列成功克隆至pSIREN质粒载体。经酶切和测序分析,重组质粒pSIREN/PB1中的siRNA编码序列均完全正确。将脂质体包裹的pSIREN/PB1质粒和病毒液同时注射入鸡胚尿囊腔后,收获的甲型流感病毒效价最低。结论成功构建了表达甲型流感病毒PB1siRNA的重组质粒pSIREN/PB1,并且它可以抑制鸡胚中流感病毒复制。此研究进一步证实了RNA干扰对流感病毒复制的抑制作用,为开发流感基因防治新方法奠定了基础。

关 键 词：流感病毒 PB1  RNA干扰  质粒载体

分 类 号：R373.1]