文献类型：期刊文章

作　　者：乔惠丽[1] 陈媛媛[2] 文祯中[1] 毕利军[2] 阚云超[1]

机构地区：[1]中英昆虫生物学联合实验室,南阳师范学院,南阳473061 [2]中国科学院生物物理研究所蛋白质科学研究平台,北京100101

出　　处：《中国生物工程杂志》

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30500097)~~

年　　份：2007

卷　　号：27

期　　号：4

起止页码：12-17

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2004、CAB、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、IC、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：大肠杆菌单链结合蛋白SSB在DNA复制、重组和修复中起着重要作用。为研究单链结合蛋白SSB的体外生物功能构建了融合蛋白SSB的表达载体并使其高效表达及易于纯化。ssb基因片段是以E.coliK-12基因组为模板经PCR扩增获得,并通过基因的体外拼接成功构建了表达载体pQE30-ssb。重组菌株M15/pQE30-ssb经过IPTG的诱导表达了蛋白SSB。收集菌体细胞、超声波破碎后离心取上清进行SDS-PAGE分析,结果表明有一与预期分子量(20.6kDa)相应的诱导表达条带出现,其表达量约占全细胞蛋白的30%且以可溶形式存在。利用固定化金属离子(Ni2+)配体亲和层析柱纯化融合蛋白SSB,其纯度达到90%。通过凝胶层析和等离子共振技术对SSB的生物功能进行了系统研究分析。结果表明,SSB蛋白以四聚体形式与单链DNA分子结合,其亲和力常数(KD)为4.79×10-7mol/L。

关 键 词：SSB蛋白  高效表达  相互作用 动力学

分 类 号：Q789]