文献类型：期刊文章

作　　者：张明明[1] 洪理泉[1] 卢仁泉[1] 郑佐娅[1]

机构地区：[1]上海交通大学医学院医学检验重点实验室,上海200023

出　　处：《现代检验医学杂志》

年　　份：2007

卷　　号：22

期　　号：1

起止页码：10-13

语　　种：中文

收录情况：CAB、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、IC、JST、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的重组及表达人cTnI-linker-TnC融合蛋白。方法应用PCR技术从人心脏cDNA文库分别扩增出cTnI和TnC基因,通过引物设计在两者之间加上19个中性氨基酸残基TS-(G4S)3-AC的linker编码序列,克隆PCR产物,并构建pET28a-cTnI-linker-TnC表达质粒,转化入大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)中,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导目的蛋白的表达,NTA树脂亲和层析纯化后检测其纯度和免疫反应性。结果成功构建了cTnI-linker-TnC融合蛋白的基因,并在大肠杆菌中实现可溶性高表达,在摇瓶中的表达量为21 mg/L,经一步NTA树脂亲和层析纯化,获得条带单一的目的蛋白,采用进口全自动免疫检测系统鉴定证实,目的蛋白有较高的免疫反应性。结论采用原核表达方法可以获得具有高纯度和高免疫反应活性的cTnI-linker-TnC融合蛋白。

关 键 词：cTnI—linker—TnC  融合蛋白 表达  

分 类 号：Q784] Q786