文献类型：期刊文章

作　　者：章涛[1] 杨贵忠[1] 袁野[1] 李苌清[1] 万敬员[1] 蒋建新[2] 周岐新[1]

机构地区：[1]重庆医科大学药理学教研室,重庆400016 [2]第三军医大学创伤烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆400042

出　　处：《中国药理学通报》

基　　金：国家自然科学基金资助项目(No30572353)

年　　份：2007

卷　　号：23

期　　号：3

起止页码：413-417

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2004、BIOSISPREVIEWS、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、EMBASE、IC、JST、RCCSE、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的构建可以高效表达人过氧化物酶体增殖物激活受体(αhPPARα)的真核细胞表达载体,为筛选作用于PPARα受体的药物提供分子平台。方法将HepG2细胞总RNA经逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)克隆hPPARα全长基因,用BamHⅠ、SalⅠ双酶切后,与相同双酶切的pIRES2-EGFP载体连接,构建phPPARα-IRES2-EGFP重组质粒,用酶切及基因测序鉴定重组质粒中hPPARα基因的完整性和可靠性;重组质粒转染293细胞,荧光显微镜观察EGFP报告基因表达强度,并对转染细胞的hPPARα表达进行荧光定量PCR及免疫细胞化学检测。结果经酶切和测序证实重组质粒构建正确,并在转染的293细胞中获得hPPARα的高效表达。结论成功构建重组质粒phPPARα-IRES2-EG-FP,为基于hPPARα受体靶点的药物筛选平台的建立提供了高效表达hPPARα的重组载体。

关 键 词：过氧化物酶体增殖物激活受体Α 基因克隆 真核表达

分 类 号：R345.46[基础医学类] R392.33