文献类型：期刊文章

作　　者：王震[1] 叶明君[1] 邹立林[1] 季敬璋[1] 陈秀枢[2] 吕建新[1]

机构地区：[1]温州医学院检验与生命科学学院浙江省医学遗传学重点实验室,浙江温州325035 [2]温州医学院检验与生命科学院微生态学研究所,浙江温州325035

出　　处：《温州医学院学报》

基　　金：浙江省科技厅科研基金重点资助项目(2004C23018)。

年　　份：2007

卷　　号：37

期　　号：1

起止页码：1-4

语　　种：中文

收录情况：CAS、IC、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的:表达SHV-4型超广谱β-内酰胺酶,对纯化的SHV-4酶进行特性研究。方法:将SHV-4基因克隆到pET26b表达质粒,重组质粒转入E.coli BL21(DE3)构建工程菌,重组工程菌经摇瓶发酵后获得种子菌,种子菌转入发酵罐发酵,当菌体密度OD600为0.8时,加入诱导剂IPTG至终浓度为1.0mmol/L,于37℃培养6h。培养液离心收获菌体沉淀,其超声裂解上清液进行Ni2+亲和层析,获取的SHV-4酶进行分子量、纯度、等电点、最适条件、米氏常数、催化常数等特性进行分析。结果:SDS-PAGE电泳,等电聚焦电泳及系列的酶动力学实验表明SHV-4酶分子量约为30kD,纯度大于95%,等电点为7.9,最适pH值为6.0～8.0,最适温度为37℃,以头孢硝噻吩为底物测定的Km值为2.61×10-6mol/L,Kcat为258s,Kcat/Km为9.88×107mol-1·s-1·vL。结论:重组的SHV-4酶初步满足制成商品酶的条件。

关 键 词：超广谱Β-内酰胺酶 SHV-4  表达  纯化 特性  

分 类 号：R978.11]