文献类型：期刊文章

作　　者：王昌梅[1] 王同映[1] 杨志愉[1] 单剑峰[1] 刘晓妮[1] 马国昌[1] 戎亚雯[1] 方井晋[1] 黄岩山[2] 周金宝[1]

机构地区：[1]杭州九源基因工程有限公司,杭州310018 [2]浙江大学医学院,杭州310005

出　　处：《中国生物工程杂志》

年　　份：2006

卷　　号：26

期　　号：12

起止页码：34-39

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2004、CAB、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、IC、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：为了延长G-CSF半衰期，利用甲醇酵母表达重组人血清白蛋白融合的集落细胞刺激因子（rHSA-G-CSF）。用PCR方法从人胎肝cDNA文库扩增出HSA cDNA序列，hG—CSFcDNA序列从大肠表达载体中酶切获取。将HSA和hG—CSF两片段连接后，克隆到酵母分泌型表达载体pGENYK中，酶切线性化后原生质体转化导入酵母细胞进行整合。工程菌经发酵罐培养表达，层析法分离纯化融合蛋白。纯化的融合蛋白经Western印迹分析表明具有HSA和G—CSF的免疫原性，体外生物学活性分析表明，同等尔数的融合表达产物的活性为E．coli表达G—CSF单体的活性的50％以上。体内动物实验研究表明，经HSA融合的G．CSF的半衰期为G—CSF单体的15～20倍。甲醇酵母表达的融合HSA的G-CSF具有比G-CSF更长的半衰期，有良好的临床应用前景。

关 键 词：HSA-hG-CSF融合蛋白  毕氏酵母 融合表达  

分 类 号：Q786]