文献类型：期刊文章

作　　者：张建华[1]

机构地区：[1]郑州大学电气工程学院生物医学工程系,河南郑州450000

出　　处：《第四军医大学学报》

年　　份：2006

卷　　号：27

期　　号：24

起止页码：2256-2258

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2004、CAB、IC、ZR、核心刊

摘　　要：目的:利用生物信息学网络资源分析融合蛋白的二级结构及其理化性质,以及探讨分泌型抗成骨肉瘤单链双功能抗体基因的表达.方法:采用PCR方法将人工合成的抗体分泌信号肽序列加在抗成骨肉瘤ScFv基因5′端,其3′与人的肿瘤坏死因子TNF-α基因连接构成分泌型单链双功能抗体ScFv-TNF-α基因,将该基因克隆至逆转录病毒表达载体PLx-SN,重组质粒pL(ScFv-TNF-α)SN在脂质体介导下转染PA317包装细胞,G418筛选,直至出现抗性克隆,扩大培养,用NIH3T3测定病毒滴度,将重组病毒感染人成骨肉瘤细胞命名为OSC/ScFv-TNF-α,以PCR,RT-PCR以及WesternBlot对ScFv-TNF-α基因修饰的OSC9901细胞进行鉴定.在构建融合蛋白之后,运用DNA分析软件(DNAssist)和蛋白质分析软件(ANTHEPROTV5)分析融合蛋白的氨基酸序列、二级结构及其理化性质.结果:经酶切分析鉴定,成功地构建了融合基因表达载体pL(ScFv-TNF-α)SN,以及WesternBlot分析证明ScFv-TNF-α基因融合蛋白的表达.运用DNAssist核酸序列分析软件分析ScFv-TNF-αDNA序列翻译并获得了氨基酸序列,运用蛋白质分析软件(ANTHEPROTV5)分析融合蛋白的二级结构及其理化性质.结论:利用生物信息学网络资源进行分析预测融合蛋白的性质,为进一步探讨单链双功能抗体基因融合蛋白提供依据.

关 键 词：单链抗体 生物信息学资源  融合蛋白

分 类 号：R246.7]