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新生大鼠海马神经元的急性分离与膜片钳技术
Rapid dissociation of hippocampal neurons from neonate rats by the whole-cell patch-clamp technique
文献类型:期刊文章
机构地区:[1]新乡医学院科技处机能学研究室,河南省新乡市453003 [2]新乡医学院第一附属医院普通外科,河南省新乡市453003 [3]新乡医学院生理学与神经生物学教研室,河南省新乡市453003
基 金:河南省自然科学基金项目(0111020300)~~
年 份:2006
卷 号:10
期 号:46
起止页码:132-134
语 种:中文
收录情况:BDHX、BDHX2004、CSCD、CSCD_E2011_2012、核心刊
摘 要:目的:获得适用于膜片钳技术的单个海马神经元。方法:实验于2005-09/11在新乡医学院机能学研究室完成。应用酶消化及机械分离法,急性分离出生3~6d的SD大鼠海马神经元,在倒置显微镜下,选取已贴壁直径约10~15μm的锥体形神经元观察其急性分离效果和细胞活性状态。电生理学的鉴定采用全细胞膜片钳的模式记录电流反应,首先在大鼠海马CA1区锥体神经元诱发出内向离子流。在大鼠海马CA1锥体神经元诱发出内向离子流后,通过程控灌流系统在细胞外液中加1μmol/L的钠通道阻断剂河豚毒素灌流同一神经元,记录内向离子流的变化。结果:①该法可获得形态良好的单个海马神经元,海马锥体细胞具有锥形胞体穴10~20μm雪和厚墩的顶树突特征。活性较好的海马神经元熏胞体呈三角形或椭圆形,表面光亮,细胞膜完整、清晰的,立体感较强。一般有1个较长的顶树突和2个以上较短的基树突。②利用膜片钳技术内向电流被诱发,用1μmol/L河豚毒素完全阻断该电流,说明该内向电流为钠电流。结论:该法可获得形态和生理特性良好的单个海马神经元,证实该方法适用于海马神经元膜片钳研究,对深入探讨药物和毒物对海马离子通道及信号转导机制的作用有重要价值。
关 键 词:海马 神经元 膜片钳术 钠通道
分 类 号:R32]
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