文献类型：期刊文章

作　　者：聂尧[1] 徐岩[1] 王海燕[1] 许娜[1] 肖荣[2]

机构地区：[1]江南大学生物工程学院,江苏无锡214036 [2]新泽西路特格斯大学分子生物学与生物化学系,美国新泽西州08854

出　　处：《化工进展》

基　　金：国家自然科学基金项目(No.20376013);国家重点基础研究发展计划项目(No.2003CB716008);教育部长江学者与创新团队发展计划(NCET04-0498);新世纪优秀人才支持计划(IRT0532)

年　　份：2006

卷　　号：25

期　　号：10

起止页码：1231-1236

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2004、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、EI、IC、JST、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：通过对近平滑假丝酵母(R)-专一性羰基还原酶(rCR)进行氨基酸序列分析并根据其序列的保守性设计PCR引物,以近平滑假丝酵母基因组为模板利用PCR技术得到目的基因rcr。该基因全长1011bp,共编码336个氨基酸。将该基因与表达载体pET21c连接后构建重组质粒pETRCR,并转化入EscherichiacoliBL21(DE3)中进行表达。重组大肠杆菌具有(R)-专一性羰基还原酶活性,可催化不对称还原2-羟基苯乙酮合成(R)-苯基乙二醇。研究发现,在重组菌培养过程中,同添加IPTG诱导培养的情况相比,不添加IPTG诱导培养的酶活及不对称转化(R)-苯基乙二醇的效果较好。在反应过程中,转化48h及在pH值8～9的条件下更有利于不对称反应的进行。另外,较高的底物浓度会对反应产生抑制作用,通过提高重组菌细胞浓度可显著提高转化效果。在5g/L的底物浓度条件下,利用0.3g/mL重组菌细胞可还原2-羟基苯乙酮得到(R)-苯基乙二醇,产物光学纯度为95.5%e.e,产率为92.6%。

关 键 词：羰基还原酶 不对称还原  重组大肠杆菌 苯基乙二醇

分 类 号：Q78]