文献类型：期刊文章

作　　者：尹志农[1] 周新[2] 郑芳[2] 赵磊[2] 夏勇[2] 胡汉宁[2] 姜新强[2]

机构地区：[1]北京微创医院暨同济大学微创医院实验中心,100022 [2]武汉大学中南医院基因诊断中心

出　　处：《中华检验医学杂志》

基　　金：湖北省武汉市晨光计划资助项目(20025001027);武汉大学杰出青年基金(20030101)

年　　份：2006

卷　　号：29

期　　号：9

起止页码：827-829

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2004、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、EMBASE、IC、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的在大肠埃希菌中表达和纯化 C 反应蛋白(CRP),并鉴定纯化蛋白的免疫反应性,为 CRP 的检测打基础。方法应用逆转录(RT)PCR 方法,从人肝细胞文库中扩增入 C 反应蛋白cDNA 基因片段,与表达质粒载体 pCRT7/NTTOPO 重组,获得表达质粒 CRP-pCRT7/NT。用氨苄青霉素平板筛选转化子,双酶切与 DNA 测序鉴定 CRP 基因表达质粒 pCRTT/NT TOPO 载体的整合状态,用 IPTG 诱导表达,并经组氨酸亲和层析柱纯化获得 CRP 的蛋白纯品。采用 Western 印迹的方法鉴定纯化蛋白的免疫反应性。结果利用表达载体 pCRTT/NT TOPO 载体表达的含6个组氨酸标签的CRP,在 SDS-PAGE 上出现1条相对分子质量约30000的阳性条带,经组氨酸亲和层析柱纯化后用Western 印迹杂交证实为目的蛋白。结论成功地构建了在大肠埃希菌表达 CRP 的质粒,建立了蛋白纯化的系统,为下一步 CRP 检测试剂盒的制备打下了基础。

关 键 词：C反应蛋白 基因表达 Western印迹杂交  

分 类 号：R346[基础医学类]